Przewlekła choroba ziarniniakowa przedstawiająca 69-letniego mężczyznę cd

Spektralną (400 do 600 nm) różnicę pomiędzy napowietrzonymi i niezalecanymi próbkami mierzono spektrofotometrycznie i obliczano ilość cytochromu b. 28 Spektroskopię ramanowską z rezonansami porównawczymi przeprowadzono tak, jak opisano .9 Przeprowadzono analizę Western blot ekstraktów neutrofili, jak poprzednio. opisany.4, 23 Izolacja i analiza RNA i genomowego DNA
Izolację RNA monocytów i genomowego DNA, jak również analizę Northern blot gp9l-phox i p22-pkox RNA, przeprowadzono tak, jak opisano w pkt.10, 23. Reakcję łańcuchową polimerazy 30 zastosowano do amplifikacji sekwencji gp91-phox z komplementarnego DNA komórek jednojądrzastych lub z genomowego DNA, ze specyficznymi starterami oligonukleotydowymi.23 Startery do amplifikacji genomu flankowały splicing 3 intronu 11 w genie gp91-phox (dane niepublikowane) (sensowny primer 5 actaggatccTATTTATACTTCGAAGTCTCC3 i antysensowny primer 5 aataagcttTTCAGGCCTGTGATCACATCT3 , z małe litery wskazujące na niekomplementarne nukleotydy, które zawierają odpowiednio miejsca BamHI i Hindlll). Amplifikowane fragmenty klonowano do pUC18, a wiele klonów sekwencjonowano za pomocą metody kończenia łańcucha dideoksynukleotydów.31 Przeprowadzono hybrydyzację swoistą allelem amplifikowanego genomowego DNA, jak opisano, 23 z znakowanymi radioaktywnie oligonukleotydami specyficznymi dla typu dzikiego (5 TTCCTGTAGGCCAATCA3 ) i mutanta (5 TTCCTGTGGGCCAATCA3 ) 3 łączenie splicingu intronu 11.
Wyniki
Badania neutrofili NADPH Oxidase
Rysunek 1. Rysunek 1. Rodowód rodziny Pacjenta. Strzałka wskazuje propositus. Normalni członkowie rodziny I-5, I-6, I-7, II-5 i II-6 mieli wartości w normalnym zakresie generowania nadtlenków granulocytów po stymulacji N-formylo-1-metionylo-1-leucylem-1 fenyloalanina (FMLP) plus cytochalazyna B (przeprowadzona zgodnie z wcześniejszym opisem) .25 Wszyscy inni normalni członkowie rodziny mieli granulocyty 98 99 100% dodatnie w testach nitroblue tetrazoliowych (przeprowadzonych jak opisano wcześniej26). Nosiciele II-2, III-3 i III-4, odpowiednio, miały populacje granulocytów, które były 50 procent, 54 procent i 27 procent dodatnie w testach nitroblue tetrazolium. Niedobór komórek w tych nośnikach wykazywał raczej ślad, niż nieobecność, aktywność zgodną z niskim poziomem resztkowego wytwarzania Nadtlenku obserwowanego w granulocytach pacjenta. Członek rodziny III-1 miał przypuszczalną diagnozę przewlekłej choroby ziarniniakowej w oparciu o jego nawracające infekcje i śmiertelne zapalenie płuc P. cepacia, z wieloma ziarniniakami i obciążonymi pigmentem makrofagami w badaniu pośmiertnym. Członek rodziny III-2 miał normalną czynność oddechową, udokumentowaną w okresie prenatalnym przez testowanie leukocytów płodowych przez nitroblue tetrazolium i potwierdzoną po urodzeniu. NT oznacza nie testowany, a slash zmarł.
W przeciwieństwie do kontrolnych neutrofili, neutrofile pacjenta wytwarzały bardzo mało Nadtlenku w odpowiedzi na stymulację octanem mirystynianu forbolu. Odpowiednie szybkości wytwarzania nadtlenków wynosiły 52,9 i 3,3 nmola cytochromu c zredukowanego na 5 x 106 komórek na 20 minut. Wynik ten był zgodny z rozpoznaniem przewlekłej choroby ziarniniakowatej. W przypadku innych członków rodziny pacjenta wytwarzanie nadtlenku przez neutrofile przedstawiono na rycinie 1
[przypisy: phenazolina, ectoskin p7, vicebrol forte cena ]